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细胞培养之支原体污染

人阅读 发布时间:2019-08-16 16:02

支原体污染是细胞培养(特别是传代细胞)时的一个世界性问题。在细胞培养过程中,支原体污染率达到了三分之二左右,然而支原体污染细胞后,培养液可不发生混浊;多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可由于传代、换液而缓解,因此易被忽视。但个别严重者,可致细胞增殖缓慢,甚至从培养器皿脱落。

当你的细胞实验出现一些异常,例如出现存活、生长状况改变,实验结果出现无法解释的差异,然而在低倍镜下却找不到原因的时候,很可能是已经被支原体污染了。

支原体是什么?

支原体(mycoplasma)为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体呈高度多形性,没有细胞壁,只有三层结构的细胞膜,故具有较大的可变性。基因组多为双链 DNA,散布于整个细胞内,没有形成的核区或拟核。

支原体的大小为 0.1~0.3um,没有细胞壁,变形能力大,故能通过滤菌器。研究表明,支原体能耗尽营养物,促进代谢积累,导致 pH 改变,对细胞造成多种影响,包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变,继而干扰实验结果,或造成无法解释的差异。

支原体污染的原因

支原体污染的来源包括工作环境、操作者本身(某些支原体在人体中属于正常菌群)、培养基、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材、制备细胞的原始组织或器官,等等。

支原体污染的危害

培养的细胞被支原体污染后,细胞的所有功能几乎都有可能改变,可能导致细胞染色体的异常和损伤,改变细胞的代谢、生长、形状、附着,影响病毒的扩增能力和产量等等。支原体污染严重时会改变被污染细胞的基因表达谱,显著改变数百个基因的表达水平。支原体污染造成常用的 MTT 细胞毒性试验严重错误,因其对 MTT 有还原作用。某些支原体也可以直接诱导树突状细胞的成熟,这对于人体免疫细胞的肿瘤治疗来说,无疑是一个灾难。

防止污染的方法

组织细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体进行治疗的,常用治疗方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。

严格使用无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染可能性的方法。使用可靠来源的细胞株,如 ATCC 供应的细胞株;操作未知是否被支原体感染的细胞时,使用非常规使用的无菌操作区域,并且使用独立的培养基和试剂。

定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O 有否被支原体污染。培训实验操作人员有高的无菌观念与合格的无菌操作技术。

华安生物也研发生产了支原体检测试剂盒,可用于客户针对各种生物材料 (如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等) 进行支原体感染的检测。应用聚合酶链式反应技术(PCR)对支原体 16s-rRNA 基因保守区域的特异性片段进行扩增检测。



该支原体 PCR 检测试剂盒优势:

1、可以在数小时内得到结果, 与传统的选择性培养基培养检测方法相比较,本方法更快速,灵敏度和特异性更高,不会出现由于培养法检测时大量培养支原体而可能带来的次级污染的问题。

2、国内外研究表明,细胞培养的支原体污染中,有 98% 以上是由以下五种支原体引起的:M.orale、M.arginini、M.hyorhinis 和 A.laidlawii,M.Fermentans。本试剂盒能检测包括以上五种常见支原体在内的 40 种支原体。

华安生物不仅提供支原体检测试剂盒,同时致力于为全球的科研工作者和工业客户提供高品质的抗体试剂及抗体服务。  提供单抗、多抗、二抗、蛋白/多肽、抗体检测用试剂等 5000 余种,公司也为客户提供定制抗体的开发、纯化和筛选服务。


 

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